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微生物菌种保藏方法

2018-06-30 10:29:16
作者:华雨生物

传代保存法

有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时,会很快死亡,因此在这种情况下,只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存,它是   基本的微生物保存法,例如酸奶等常用生产菌种的保存。

传代保存时,培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于   适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。

液体石蜡覆盖保存法

该法较前一种方法保存菌种的时间   长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧等的保存。此法可防止干燥,并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点,同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存,而某些如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。

悬液保存法

即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有:

①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

载体保存法

将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种:

①土壤保存法

主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在的土壤中加入菌液,立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥,然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜,土壤需风干、粉碎、过筛和。

使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是:取适量土壤(5克)置于塞有棉塞的试管中,加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤持水量的60%为宜),然后高压。再将需保存的微生物进行大量接种,培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止,移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封,冷藏或室温保存。

②砂土保存法

取清洁的砂,过60目筛去掉大砂粒,并用磁铁吸去砂中铁屑,再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次,干燥后,置于试管或安瓶管中保持2~3cm深,再经干热后,加入1ml菌种培养液,经充分混匀后,放入真空干燥器中,干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经HCl预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后,再进行菌种保藏。

③硅胶保存法

以6~16目的无色硅胶代替砂子,干热后,加入菌液。加菌液时,由于硅胶的吸附热常使温度升高,因而需设法加以冷却。

④磁珠保存法

将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4),上铺玻璃棉,再放上10~20粒磁珠,经干热后,接入菌悬液,冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很,特别适用于根瘤菌,可保存长达两年半时间。

⑤麸皮保存法

在麸皮内加入60%的水,经后接种培养,干燥保藏。

⑥纸片(滤纸)保存法

将纸片浸入培养液或菌悬液中,常压或减压干燥后,置于装有干燥剂的容器内进行保存。

寄主保存法

微生物侵入其寄主后加以保存的方法。


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