微生物菌种保藏方法

传代保存法

有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是   基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。

传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于   适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

液体石蜡覆盖保存法

该法较前一种方法保存菌种的时间   长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。

悬液保存法

即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有：

①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

载体保存法

将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种：

①土壤保存法

主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和。

使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤持水量为宜)，然后高压。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。

②砂土保存法

取清洁的砂，过60目筛去掉大砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用NaOH溶液、HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持2～3cm深，再经干热后，加入1ml菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂(经HCl预处理)和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后，再进行菌种保藏。

③硅胶保存法

以6～16目的无色硅胶代替砂子，干热后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。

④磁珠保存法

将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，经干热后，接入菌悬液，冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。

⑤麸皮保存法

在麸皮内加入水，经后接种培养，干燥保藏。

⑥纸片(滤纸)保存法

将纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。

寄主保存法

微生物侵入其寄主后加以保存的方法。